Informe 8: Centrifugacion

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centrifugación

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método que permite separar las partículas presentes en un medio líquido o
semilíquido, utilizando una fuerza de aceleración, que imprime a las partículas una velocidad y un
movimiento diseccionado, aprovechando su densidad característica

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necesaria cuando las particulas tienen una densidad...

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densidad muy cercana al solvente que los disuelve son más difíciles de separar, y es necesario aplicar la
centrifugación para poder lograr el proceso de separación.

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, la velocidad de sedimentación de
las partículas es proporcional a la fuerza aplicada.

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Adicionalmente, las propiedades físicas de la
solución también afecta la velocidad de sedimentación de las partículas.

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Los rotores pueden ser verticales, zonales, de ángulo fijo o de ángulo variable

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un
rotor vertical facilita la separación y formación de fases con mayor eficiencia que uno de ángulo variable
mientra que un rotor de ángulo variable es mejor para autogenerar gradientes discontinuas.

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. Se pueden separar fracciones
subcelulares utilizando soluciones con viscosidad diferente a la que las mantiene en suspensión, y con
densidades variables para una separación cualitativa o para mediciones de densidad o peso molecular
de las moléculas a estudiar.

tipos?

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Centrifugación Diferencial
dependiendo de sus diferentes formas, densidades y
tamaños. En una suspensión de sedimentos las partículas se separaran a diferentes velocidades, las
más densas y grandes sedimentan más rápido

Centrifugación Zonal o de Velocidad de sedimentación
depende del coeficiente de sedimentación.

----Isopícnica o de Equilibrio de Sedimentación

La gradiente debe ser continua y debe contener todas las
densidades de las partículas a separar, e inclusive la densidad más alta debe ser mayor a la de la
partícula más densa que se quiere separa

Método de Barrera
uso de un medio con densidad constante, dicha densidad debe ser intermedia entre las
densidades de las partículas que se desean separar. Se utilizan medios comerciales como Ficoll-paque, Lymphoprep, Nycoprep

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¿Qué es el Ficoll?

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El ficoll 400 es un polímero sintético de sacarosa y epiclorhidrina, de 400.000 daltons, es hidrofilico (soluble en agua). Forma un buffy coat bajo la capa del plasma. Este buffy contiene las PBMCs. Además, el ficoll causa la aglutinación de los eritrocitos, lo cual facilita aún más su sedimentación.

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¿Qué es una gradiente de sucrosa?

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La centrifugación en gradiente de densidad es el método preferido para la purificación de orgánulos subcelulares y macromoléculas. Se generan gradientes de densidad creando capas de medios de gradientes como la sacarosa en un tubo, la capa más pesada en la base y la más liviana en la parte superior en modo discontinuo o continuo.

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4. Puede decir el posible rango de densidad que tiene cada vial?

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Relativamente se puede saber el grado de densidad que tendrían los componentes comparándolo al punto en el que se encuentra un componente con una densidad conocida. Por ejemplo en estos casos, la sacarosa permite formar disoluciones con una densidad de hasta 1.28 g/cm3, mientras que el Ficoll genera a una densidad de 1,077 g/cm3.

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conclusiones

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• Se pudieron utilizar satisfactoriamente las distintas separaciones de Células Mononucleares de Sangre Periférica (CMSP), linfocitos o los monocitos, de otras células de la sangre mediante el uso de Ficoll y sacarosa.
• Ficoll se encuentra luego de centrifugación entre la base sedimentada roja, y el anillo blanquecino puesto que tiene una densidad apropiada que esta intermedio a ellos.
• Se encontraron mayor porcentaje de células vivas en Ficoll con relación a sacarosa. Sacarosa genera osmolaridad, lo que se comprobó con fotografías a las células y observaciones a la morfología.